皮膚組織單細(xì)胞解離酶MJ007專為人、小鼠、大鼠等動(dòng)物皮膚組織單細(xì)胞懸液制備設(shè)計(jì)，通過多元復(fù)合酶的溫和酶解作用將皮膚組織高效解離成為單個(gè)細(xì)胞懸液，在高得率的同時(shí)能夠獲得高活性的單細(xì)胞，后續(xù)適用于單細(xì)胞測(cè)序、流式細(xì)胞分析、流式細(xì)胞分選、原代細(xì)胞培養(yǎng)、類器官3D培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：
1、一步即用型
本產(chǎn)品只需把配套的酶干粉溶解在溶解液里，一步操作即可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。無需像進(jìn)口競(jìng)品一樣，把三四種酶分別溶解在不同溶液里，再分別進(jìn)行體積計(jì)算，后量取不同體積的酶混合在一起并混勻才能使用，本產(chǎn)品無需任何稱量、計(jì)算，避免多步驟操作和復(fù)雜的計(jì)算，減少出錯(cuò)概率。
2、多元復(fù)合酶
本產(chǎn)品是自主研發(fā)生產(chǎn)的多元復(fù)合酶，根據(jù)不同組織的細(xì)胞間質(zhì)種類配備8種以上的復(fù)合酶，可以更好的消化解離細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，比單純使用進(jìn)口膠原酶IV、DNA酶或進(jìn)口競(jìng)品的三四種混合酶的解離效率更高，解離時(shí)間短、細(xì)胞得率高、細(xì)胞活性強(qiáng)、抗原表位完整，自研自產(chǎn)成本更低，更有競(jìng)爭(zhēng)力。
3、解離時(shí)間短
由于本產(chǎn)品使用的是8種以上自研自產(chǎn)的特異性組織解離酶，大多數(shù)qi官組織在10-15分鐘即可解離完全，解離時(shí)間超短，而單純使用進(jìn)口膠原酶IV、DNA酶或進(jìn)口競(jìng)品的三四種混合酶需要1小時(shí)左右，甚至需要2-3小時(shí)才能解離完全。
4、細(xì)胞得率高
建立在多元復(fù)合酶的基礎(chǔ)上，該產(chǎn)品可以更好的消化細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，組織消化更徹底，組織單細(xì)胞完全釋放出來，組織團(tuán)塊殘留少，因此細(xì)胞得率更高。
5、細(xì)胞活性強(qiáng)
針對(duì)不同的組織該產(chǎn)品配套了不同的特異性解離復(fù)合酶，該復(fù)合酶是溫和的解離方式，不像胰酶一樣對(duì)細(xì)胞有較大損傷，并且該復(fù)合酶酶解消化時(shí)間更短，大幅減少了細(xì)胞的離體時(shí)間，防止了解離酶的過度消化，因此能得到更高活率的單細(xì)胞。抗原表位更完整的細(xì)胞。
6、抗原表位完整
由于該產(chǎn)品酶解效率更高，酶解時(shí)間和細(xì)胞離體時(shí)間更短，組織細(xì)胞損傷更低，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性更好，細(xì)胞活性更強(qiáng)，因此抗原表位更完整，更有利于抗ti結(jié)合染色，解離的單細(xì)胞更適合進(jìn)行流式分析分選實(shí)驗(yàn)。
使用方法
1、溶解酶干粉
初次啟用試劑盒時(shí)執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液qiang取B瓶中的溶解液反復(fù)吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中，必要時(shí)可將qiang頭口用剪刀剪大，確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中；隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完全溶解，必要時(shí)可放置搖床上搖晃至完全溶解，完全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。
2、過濾分裝解離酶
在A瓶中酶干粉完全溶解在B瓶溶解液后，根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)如需要無菌解離組織，則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除jun后分裝。建議每5mL分裝一瓶，分裝至A瓶中，分裝后應(yīng)立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6個(gè)月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每?jī)鋈谝淮蚊富顣?huì)降低一部分，酶活降低時(shí)可增加酶的使用量以增強(qiáng)酶解效果。
3、酶解實(shí)驗(yàn)操作
(1)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：預(yù)制碎冰，冰上解凍單細(xì)胞解離酶和酶解終止液，單細(xì)胞解離儀器開機(jī)預(yù)熱，PBS預(yù)冷，眼科剪、鑷子等無菌手術(shù)器械，40 μm無菌細(xì)胞篩，離心管、離心機(jī)等預(yù)冷。
(2)組織收集：無菌條件下收集組織，立即置于冷的PBS中，盡可能4h內(nèi)處理，如需放置更長(zhǎng)時(shí)間，請(qǐng)使用高活性組織保存液（貨號(hào)MJ104）。
(3)清洗組織：將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì)，稱重記錄。
(4)剪碎組織：將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中，用鋒利眼科剪碎成1-2 mm3小塊，剪至泥糊狀，剪得越碎酶解就越充分，單細(xì)胞酶解時(shí)間就會(huì)越短；如有配備組織單細(xì)胞解離儀，覺得剪碎較麻煩也可不用嚴(yán)格剪碎，同樣能獲得較好的解離效果。
(5)酶解組織：組織剪碎后，取適量單細(xì)胞解離酶加入解離管中，上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。
①如配備有組織單細(xì)胞解離儀，可按照儀器操作規(guī)范進(jìn)行單細(xì)胞解離。本產(chǎn)品適用市面上所有進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)品牌的組織單細(xì)胞解離儀，但需注意本產(chǎn)品解離效率比自備酶或其他競(jìng)品的酶都高，解離時(shí)間可減少至少一半，需每隔5-10min確認(rèn)一下解離情況，不同組織解離完全的時(shí)間從5min到50min不等，在保證解離效果情況下盡可能減少酶解時(shí)間，酶解完全即可終止酶解；
②如未配備組織單細(xì)胞解離儀，也可進(jìn)行手動(dòng)解離。在剪碎組織步驟中需嚴(yán)格按照要求剪碎組織；根據(jù)組織和所加酶體積選擇在1.5mL EP管或5mL EP管中，將解離酶與組織充分混勻，用剪刀將1mL移液qiangqiang頭口稍微剪大后，用移液qiang用力吹打混合物，如吹打堵塞qiang頭說明組織剪碎不夠徹底，可繼續(xù)剪碎組織或?qū)?/span>qiang頭再剪大一些，保證能用移液qiang反復(fù)吹打混合物，反復(fù)吹打十余次后立即放入37℃培養(yǎng)箱、水浴或金屬浴中孵育，有搖床效果更佳，每孵育5分鐘需進(jìn)行一次反復(fù)吹打，直至組織團(tuán)塊完全解離成單細(xì)胞懸液。
(6)單細(xì)胞過濾：待組織完全解離后，立即瞬離解離管3s，并將解離管插在冰上，用移液qiang吸取上清通過40 μm的濾網(wǎng)進(jìn)行過濾，過濾全程在冰上操作。
(7)終止酶解：取等量的酶解終止液（貨號(hào)MJ102）或完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止酶解。
(8)收集細(xì)胞：4℃、400g離心5分鐘后棄上清，用預(yù)冷的PBS清洗后再離心棄上清。
(9)紅細(xì)胞裂解：取適量紅細(xì)胞裂解液（貨號(hào)MJ103）重懸細(xì)胞沉淀，冰上孵育10分鐘，間歇吹打輕搖，4℃、300g離心5分鐘后棄上清。
(10)清洗：取預(yù)冷的PBS重懸，4℃、300g離心5分鐘后棄上清，重復(fù)清洗2次
(11)去除碎片：如碎片較多，可用高效碎片去除劑（貨號(hào)MJ101）去除碎片。
(12)細(xì)胞活性檢測(cè)：臺(tái)盼藍(lán)或AOPI染色，活細(xì)胞率應(yīng)＞85%。
(13)細(xì)胞凍存：如單細(xì)胞解離后暫時(shí)無法進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，可使用高效高活細(xì)胞凍存液（貨號(hào)MJ105）將單細(xì)胞重懸后直接凍存于-80℃，可凍存數(shù)年。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品單供科研使用；如下游實(shí)驗(yàn)需無菌培養(yǎng)，全程需在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作，避免污染；酶解需在37℃，其他操作均在冰上操作，嚴(yán)格控制溫度；根據(jù)組織酶解量調(diào)整酶解時(shí)間，勤觀察及時(shí)確認(rèn)裂解階段，在保證裂解效果情況下盡可能減少酶解時(shí)間，以免時(shí)間過長(zhǎng)造成對(duì)細(xì)胞的損傷；若用于單細(xì)胞測(cè)序等要求較高的單細(xì)胞制備，全程需加快速度，單細(xì)胞解離后需立即進(jìn)入下游建庫步驟；該酶溶解后-20℃或-80℃保存，可保存6個(gè)月，單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每?jī)鋈谝淮蚊富顣?huì)降低一部分，酶活降低時(shí)可增加酶的使用量以增強(qiáng)酶解效果。